什么是真核生物表達載體?桐鄉(xiāng)小老板來為你揭秘
【真核生物表達載體】在原核細胞(如大腸桿菌) 系統(tǒng)中表達真核基因合成真核蛋白往往存在兩個主要問題:其一是原核細胞對真核生物活性蛋白,特別是具有生物學功能的膜蛋白或分泌性蛋白,不能進行有效的翻譯后加工,包括二硫鍵形成、糖基化、磷酸化、寡聚體形成及由特異性蛋白酶裂解等,因而無法生產出名符其實的真核生物活性蛋白;其二是在原核細胞中合成的真核蛋白比活性都很低,這可能與蛋白的折疊方式不正確或折疊效率低下有關。
鑒于上述原因,發(fā)展真核細胞( 如哺乳動物培養(yǎng)細胞) 表達系統(tǒng)就顯得很有必要,尤其是對于生產生理活性物質的生物制藥領域來說更具有重要意義。
真核細胞表達系統(tǒng)可以分為兩類:一類是采用病毒載體的表達系統(tǒng),另一類是轉染DNA的表達系統(tǒng)。通??寺』哪康幕虮仨毑迦脒m當?shù)?strong>真核生物表達載體并在細菌中克隆和復制擴增后才轉染哺乳動物細胞。用于在哺乳動物細胞中導入和表達克隆化目的基因的質粒載體經過改造后既帶有與待表達基因序列5′端和3′端相匹配的限制酶切位點,又帶有具備所需特異性的調控序列元件。
真核生物表達載體既含有便于在細菌中克隆和復制擴增重組載體的原核質粒序列,包括復制子、抗生素抗性基因、單一限制酶切位點等,又帶有只能在真核細胞中表達的真核表達組件。基本的真核表達組件包括啟動子元件、增強子元件、加poly (A)信號以及用于復制和選擇的元件。真核生物表達載體